CCK-8試劑盒(細胞增殖及毒性檢測試劑盒)使用說明書

【包裝規格】

【保存條件】

4℃避光保存年有效，-20℃避光保存兩年有效。

【概述】

Cell Counting Kit-8試劑盒簡稱CCK-8試劑盒，可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。因此可利用這特性直接進行細胞增殖和毒性分析。該試劑主要用途有：藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。

【使用方法（僅供參考）】

1. 用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量。通常細胞增殖實驗每孔加入100μl 2×103個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100μl 5×103個細胞(具體每孔所用的細胞的數目，根據細胞的大小、細胞增殖速度的快慢等因素決定，推薦進行預實驗選擇合適的細胞數量)。按照實驗要，進行培養并給予0-10μl特定的藥物刺激。

2. 每孔加入10μl CCK-8溶液（如果起始的培養體積為200μl，則加入20μl CCK-8溶液，其它情況以此類推）。可以用加了相應體積細胞培養液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。如果擔心所使用的藥物會干擾檢測，設置加了相應量細胞培養液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。

3. 在細胞培養箱內（37°C）繼續孵育0.5-4小時，對于大多數情況孵育1小時即可。時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的時間點用于后續實驗。

4. 在450nm測定吸光度。可以使用吸光度在430-490nm之間的濾光片，但是450 nm濾光片的檢測靈敏度高。

5. 計算方法

細胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100%

抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As：實驗孔(含有細胞的培養基、CCK-8、待測物質) Ac：對照孔(含有細胞的培養基、CCK-8、沒有待測物質)

Ab：空白孔(不含細胞和待測物質的培養基、CCK-8)

【注意事項】

1. 初次實驗可選擇3-5個孔進行預實驗選擇合適的細胞數量。

2. 由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養時間較長，定要注意蒸發問題。方面，由于96孔板周圍圈容易蒸發，可以采取棄用周圍圈的辦法，改加相同量的PBS、水或培養液；另方面，可以把96孔板置于靠近培養箱內水源的地方，以緩解蒸發。

3. 當有還原性物質存在時會影響CCK- 8的測定，增加OD值；在有氧化性物質存在時會抑制測定反應的發生，減小OD值；在有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可。

4. 在做加藥實驗時，如果藥物具有還原性，就會和CCK- 8試劑發生顯色反應，增加吸光度。解決辦法：首先要確認藥物是否有吸收，在含有藥物的培養基中加入CCK- 8，測定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含藥物的培養基 (只加CCK-8) 的吸光度高，則證明藥物有影響，可在加CCK- 8之前更換培養基，去掉藥物的影響。

5. 如果測定的OD值太低可適當增加細胞數量或延長加入CCK-8溶液后的染色時間。

6. 用酶標儀檢測前確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。

7. 僅用于實驗室，不適合農業/家庭/臨床用途使用。

8. 為了您的安全與健康，請穿實驗服并戴次性手套操作。