4％組織細(xì)胞固定液使用說明書

【包裝規(guī)格】

【保存條件】

-20℃避光保存，有效期1年；4℃避光儲存，有效期3個月。

【概述】

固定液可使細(xì)胞或組織的蛋白質(zhì)凝固，終止內(nèi)源性或外源性酶反應(yīng)，防止組織自溶或異溶，以保持原有結(jié)構(gòu)和形態(tài)。對免疫組化而更有原位保存抗原的作用，避免抗原失活或彌散。固定液種類很多，常見的有多聚甲醛、甲醛、戊二醛、乙醇、丙酮等。 

多聚甲醛固定液是種廣泛用于免疫組化(IHC)、免疫熒光( IF)、免疫細(xì)胞化學(xué)(IC)、流式分析(FACS)等檢測時組織、組織切片、細(xì)胞等生物樣品固定的溶液。

本產(chǎn)品為4% 多聚甲醛PBS溶液(4% PFA)，主要由多聚甲醛、磷酸鹽、去離子水組成，該固定液適合于絕大多數(shù)組織和細(xì)胞的固定，是免疫組織化學(xué)和培養(yǎng)細(xì)胞的固定液之，它能較好的保護(hù)組織和細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)以及核酸。其固定效果好、應(yīng)用廣，適用于各種常見細(xì)胞或組織的固定，對皮膚、肌肉、內(nèi)臟等均有良好的固定效果，但主要作用于蛋白質(zhì)，無法固定尿酸和糖類等。

若使用低濃度多聚甲醛，可使用PBS按比例釋。

【使用建議】

對于細(xì)胞樣品，去除培養(yǎng)液后，按照每六孔板個孔加入1毫升固定液的比例，加入4%多聚甲醛固定液。對于細(xì)胞涂片等其它細(xì)胞樣品，加入固定液的量以充分蓋住樣品為準(zhǔn)。通常室溫固定10-20分鐘即可，但固定較長時間，例如1-2小時也是可以的。后續(xù)使用適當(dāng)?shù)南礈煲撼浞窒礈煲匀コ龤埩舻亩嗑奂兹?/span>

對于組織切片，加入4% 多聚甲醛固定液量以充分覆蓋切片為準(zhǔn)，或使用染色架進(jìn)行固定。通常室溫固定10-20分鐘即可完成固定，但切片較厚時可以固定較長時間，例如1-2小時。后續(xù)使用適當(dāng)?shù)南礈煲撼浞窒礈煲匀コ龤埩舻亩嗑奂兹?/span>

對于組織塊樣品，浸泡入4% 多聚甲醛固定液中，室溫或4℃浸泡固定2到24小時。建議不超過8小時，除非組織塊特別大，難以滲透。固定完成后，放入裝有蒸餾水的離心管中清洗，每15-30分鐘換次水，共6-8次，建議在搖床進(jìn)行，或用流水沖洗1-2小時。隨后梯度脫水，進(jìn)行包埋。如果暫時不包埋可放入70-75%的酒精中保存。

如將組織樣品置于4% 多聚甲醛固定液中浸泡儲存，請避光放置。

【注意事項(xiàng)】

1.     僅限于科研使用，不可用于各種食品藥品或臨床治療中。

2.     為了您的安全與健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴次性手套操作。

3.     本產(chǎn)品放置過久其中的醛基可能會被氧化為酸，使溶液pH降低，從而影響染色。

4.     不同細(xì)胞或組織樣品所的固定時間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

5.     多聚甲醛雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過24小時。

6.     多聚甲醛可長期存在于固定過的細(xì)胞或組織樣品中，固定完成后用適當(dāng)?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時仍會有殘留，因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如果受醛基影響，須盡量洗去殘留的多聚甲醛。

7.     多聚甲醛固定液固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時，有時要對抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。

8.     醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，多聚甲醛固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時，有時要對抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。