RIPA裂解液（高強度）使用說明書

【包裝規格】

【保存條件】

-20℃保存，有效期至少1年，頻繁使用可放置4℃保存。

【概述】

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP和ELISA等。
      RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種，根據其裂解液的強度大致可以分為高強度、中強度、低強度三類。請根據不同求選擇不同強度RIPA裂解液。

【使用建議】

如發現RIPA有沉淀，請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。根據使用量，取每1ml RIPA加入10ul PMSF，使PMSF的終濃度為1mM?；靷溆茫?/span>PMSF現用現加）。

1. 樣品前處理：

a) 對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗遍。按照6孔板每孔細胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。

b) 對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。

c) 對于組織樣品：把組織剪切成細小的碎片。按照每20mg組織加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃漿器漿，直至充分裂解。

2. 后處理：將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

【注意事項】

1. 為了您的安全與健康，請穿實驗服并戴次性手套操作。

2. 本產品長時間低溫存放可能會出現沉淀，可在37oC水浴約10分鐘以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解后即可正常使用。

3. 為保證佳的使用效果，請盡量避免過多的反復凍融，可分裝后使用。

4. 裂解樣品的所有步驟都在冰上或4℃進行。

5. RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現小團透明膠狀物，屬正?，F象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續實驗；如果要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。

6. 該試劑僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。